Оценка фагоцитарной активности и окислительного взрыва гранулоцитов играет важную роль в современной практической иммунологии. Так, при диагностике первичных иммунодефицитов, оценка фагоцитоза является тестом первого уровня. Большое значение данное исследование имеет так же при вторичных иммунодефицитах, после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток, при синдроме системного воспалительного ответа (SIRS). Оценка фагоцитарной активности и окислительного взрыва гранулоцитов рекомендуется пациентам со следующими симптомами:

• Рецидивирующие и хронические инфекции кожи и слизистых (пиодермия, абсцессы, импетиго, диссеминированные кандидозы, хронический фурункулез, язвенные поражения кожи);
• Инфекции лимфатических узлов;
• Гингивиты, афтозный стоматит;
• Инфекции верхних дыхательных путей (синуситы, бронхиты);
• Воспаление органов таза;
• Остеомиелиты, менингиты;
• Сепсис;
• БЦЖиты после вакцинации;
• Инфекции пиогенными бактериями, грибковыми агентами и паразитами.

Набор FagoFlowEx® разработан для оценки фагоцитарной активности и окислительного взрыва гранулоцитов в образцах гепаринизированной цельной крови методом проточной цитометрии. Этот тест основан на оценке окислительного взрыва в гранулоцитах после стимуляции E.Coli. После поглощения бактерии в фагоците активируется NADPH оксидаза, которая опосредует продукцию активных форм кислорода (респираторный взрыв). Продукты кислорода внутри фагоцита окисляют дигидрородамин 123 (DHR123) и превращают его во флуоресцентный родамин 123, который детектируется на проточном цитометре. В качестве положительного контроля используется стимулированный ФМА (форбол-12-миристат-13-ацетат) образец, который инициирует
кислородный взрыв без адгезии и поглощения патогена.

Исследуемый образец цельной гепаринизированной крови инкубируют в присутствии E.coli и DHR123. В качестве положительного контроля используют тот же образец, инкубированный с ФМА и DHR123; в качестве отрицательного контроля – образец инкубированный только с DHR123. Инкубация проводится при 37 °С на водяной бане или в воздушном инкубаторе. После этого проводят лизис эритроцитов и анализируют на проточном цитометре. Флуоресценция родамина 123, возникающая при окислении DHR123, детектируется на канале FL1 (525 нм). Родамин 123 быстро эвакуируется из гранулоцитов, поэтому необходимо проанализировать образцы в течение 1 часа после лизиса.
Для сравнения продукции активных форм кислорода в разных образцах крови используется индекс стимуляции (SI). Это расчетная величина, равная отношению средней интенсивности флуоресценции (MFI) активированных гранулоцитов стимулированного образца к MFI отрицательного контроля (для того же образца).