Назначение: набор t-PA Combi Actibind ELISA предназначен для количественного определения концентрации антигена и активности человеческого тканевого активатора плазминогена (t-PA) в образцах плазмы (цитратной или ЭДТА) методом иммуноферментного анализа. Настоящий набор u-PA Actibind  ELISA специально разработан для мониторинга антигена u-PA и его функции при тромболитической терапии с использованием одноцепочечной и двуцепочечной u-PA.
Длина волны измерения: 405 нм (активности), 50 нм (концентрации антигена).
Диапазон измерения концентрации антигена t-PA 0.1-20 нг/мл; активности t-PA 0.05-10 Е/мл.
Специфичность: данный метод t-PA Combi Actibind ELISA определяет функциональную активность t-PA, антиген t-PA, не связанный в комплексе, и комплекс t-PA-PAI-1. Присутствие других активаторов плазминогена не влияет на результаты измерений данным методом.
Приложения теста: к активаторам плазминогена относятся фактор XIIа, тканевой плазминогеновый активатор (t-PA) и урокиназа (u-PA). Действие активаторов регулируется ингибиторами активации (PAI-1, α2-антиплазмин). От соотношения активаторов-ингибиторов плазминовой системы зависит скорость фибринолиза и риск тромботических осложнений.
Тканевой активатор плазминогена (t-PA) - это гликопротеин с м.м. 70 кДа, основной активатор фибринолитической системы крови. Он синтезируется эндотелиальными клетками и секретируется в кровоток после воздействия различных стимулов, таких, например, как венозная окклюзия или физическая нагрузка. t-PA уникален среди активаторов плазминогена, так как его действие высокоспецифично по отношению к фибрину. Превращение плазминогена в плазмин под воздействием t-PA в отсутствие фибрина идет крайне медленно, и только в присутствии фибрина, с поверхностью которого он связывается, t-PA эффективно активирует Glu-плазминоген и происходит каталитическое расщепление, в результате которого образуется плазмин.
Плазмин, в свою очередь, катализирует гидролитическое расщепление фибрина, нерастворимого белкового полимера тромба. Концентрация циркулирующего t-PA в плазме составляет примерно 2-8 нг/мл. Однако 95% циркулирующего t-PA входит в состав комплекса с ингибитором активатора плазминогена PAI-1 и, следовательно, находится в неактивном состоянии. При венозной окклюзии концентрация t-PA увеличивается до 15 нг/мл или выше, соответственно, возрастает и его активность. Такое повышение, возможно, происходит как благодаря увеличению выброса t-PA эндотелиальными клетками, так и за счет снижения вымывания t-PA из места окклюзии. Активность t-PA может быть измерена только в образцах, из которых предварительно были удалены ингибиторы t-PA. В данном методе Actibind это легко достигается специфической иммуноадсорбцией t-PA, содержащегося в образцах плазмы, с помощью антител, иммобилизованных на поверхности лунок микропланшета. На первом этапе t-PA и комплексы t-PA-PAI-1 связываются в лунках микропланшета, а затем определяется количество активного несвязанного в комплекс t-PA с использованием раствора Glu-плазминогена, фрагментов фибриногена и синтетического субстрата, который взаимодействует с плазмином, образующимся в ходе реакции, что в результате приводит к формированию цветного продукта.
Низкая активность на первом этапе может объясняться как сниженным общим количеством t-PA, связавшегося в лунках микропланшета, так и избытком PAI-1, содержащегося в образцах плазмы и инактивирующего t-PA путем образования комплексов t-PA-PAI-1. Для дифференцирования этих двух причин снижения активности t-PA на втором этапе данного метода Actibind определяют общее количество t-PA антигена, связавшегося в лунках микропланшета, с помощью моноклональных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена. Нормальные значения уровня t-PA антигена в плазме (2-8 нг/мл) находятся в нижней части измеряемого диапазона, что затрудняет определение значительного снижения уровня t-PA антигена в плазме. Ожидаемые значения активности, определяемой в образцах плазмы в норме, также близки к нулю. Для определения активности t-PA необходимо использовать образцы плазмы, полученные при венозной окклюзии. Результаты, полученные при анализе данным методом Actibind t-PA, могут быть использованы для определения различных изменений в фибринолитическом потенциале.
1. Повышенные уровни t-PA антигена и активности t-PA.
Такие результаты свидетельствует об увеличении выброса t-PA, который не сбалансирован соответствующим усилением выброса PAI-1. Это указывает на первичный гиперфибринолиз и вероятно приведет к образованию плазмина, расходу ингибиторов плазмина и деградации других белков плазмы, таких как фибриноген и фактор VIII.
2. Повышенный уровень t-PA антигена и нормальная активность t-PA.
Такой результат отражает длительное накопление t-PA из-за снижения его деградации в печени. Это может наблюдаться при различных заболеваниях печени. Если повышение уровня антигена нейтрализуется одновременным повышением уровня ингибитора PAI-1, то заметным остается только повышение уровня антигена t-PA. Необходимо добавить, что определенные виды гепариновой терапии могут приводить к значительному повышению уровня t-PA антигена при низкой или незначительно повышенной активности t-PA.
3. Сниженные t-PA антиген и t-PA активность.
Такой результат может быть безошибочно получен только при тестировании образцов плазмы при венозной окклюзии. Такие образцы плазмы должны показывать повышение как активности, так и антигена. Если уровни и активности, и антигена снижены в таких образцах, то это говорит о неспособности организма пациента адекватно реагировать на данный тип стимуляции. Приблизительно 10% всех пациентов, страдающих тромбозом, попадают в эту группу.
4. Сниженная t-PA активность при нормальном уровне t-PA антигена.
Аналогично предыдущему случаю, такой результат может наблюдаться только при тестировании образцов плазмы при венозной окклюзии. В отличии от группы, описанной в разделе 3, у таких пациентов происходит нормальная секреция t-PA антигена в ответ на венозную окклюзию или иную стимуляцию. Однако слишком высокий уровень PAI-1 нейтрализует увеличившуюся активность t-PA, в результате чего наблюдается высокий уровень комплекса t-PA - PAI-1. Приблизительно 20% пациентов с тромбофилией попадают в эту группу.
Оценка результатов
Нормальные уровни в плазме: антиген 2-8 нг/мл, активность, приблизительно 0 Ед./мл.
Значения, получаемые после венозной окклюзии, должны составлять: антиген больше, чем +15 нг/мл, активность +0.5 Ед./мл.
Недостаточная активность t-PA в плазме, взятой при венозном застое, свидетельствует либо о значительном повышении PAI-1 в плазме, либо о дефекте способности организма пациента синтезировать или секретировать t-PA. Если при измерении уровня t-PA антигена после венозного застоя был получен результат, не превышающий 10 нг/мл, то недостаточность t-PA активности может объясняться недостаточным уровнем синтеза t-PA антигена и/или его секреции. Если в этом случае концентрация t-PA антигена превышает 10 нг/мл, то наиболее вероятной причиной может быть повышенный уровень PAI-1, снижающий активность. Оба варианта свидетельствуют о снижении фибринолитической активности и, таким образом, усилении склонности к тромбозу. Должны быть проведены необходимые измерения для снижения риска тромбоза. Повышенный базовый уровень t-PA антигена, также как и проявление активности t-PA, является показателем гиперфибринолиза.
Определение активности и количества t-PA можно рекомендовать в качестве предварительного скрининга всей плазминовой системы. Для дальнейшего исследования фибринолитического звена в зависимости от результатов рекомендуется провести анализ других маркеров: концентрации комплекса «t-PA/PAI-1», концентрации или активности PAI-1, уровня Glu-плазминогена (PAP-комплексы для оценки гиперфибринолиза, t-PA-PAI-комплексы для оценки функции печени: соответствующие наборы производства компания TC: кат.№ 12060 PAP-комплекс ELISA и кат.№ 12080 t-PA-PAI-1 комплекс ELISA).