5X реакционные смеси qPCRmix-HS HighROX и qPCRmix-HS LowROX предназначены для высокоспецифичной ПЦР в реальном времени в присутствии референсного красителя ROX.

Смесь qPCRmix-HS HighROX подходит для real-time амплификаторов, требующих высокой концентрации красителя ROX в реакции (финальная концентрация - 500 нМ):
- Life Technologies (ABI): 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, StepOne Plus, StepOne.

Смесь qPCRmix-HS LowROX подходит для real-time амплификаторов, требующих низкой концентрации красителя ROX в реакции (финальная концентрация - 30 нМ):
- Life Technologies (ABI): 7500, 7500 Fast, ViiA 7, QuantStudio 12K;
- Stratagene: Mx4000, Mx3005P, Mx3000P.

В зависимости от решаемой задачи, для регистрации накопления продуктов амплификации могут быть использованы различные системы детекции: как интеркалирующие красители (SYBR Green I, EvaGreen и др.), так и меченые пробы (напр. TaqMan). Пассивный референсный краситель ROX обеспечивает нормирование сигналов репортерной флуоресценции, что позволяет корректировать флуктуацию сигналов между пробами в пределах эксперимента. В данных смесях ROX имеет максимум возбуждения флуоресценции при 578 нм и максимум испускания при 600 нм.

В состав смесей qPCRmix-HS HighROX и qPCRmix-HS LowROX входят следующие компоненты: HS Taq ДНК полимераза, референсный краситель ROX, смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, Mg2+ и реакционный буфер. Для постановки ПЦР в смесь требуется добавить праймеры, матрицу ДНК, краситель или пробу для детекции продукта ПЦР и воду.

Реакционный буфер оптимизирован для специфичной работы HS Taq ДНК полимеразы, а также для длительного хранения и многократного замораживания-размораживания смеси. Концентрация ионов магния в 1х реакционной смеси – 3 мМ, концентрация каждого дезоксинуклеозидтрифосфата – 0.12 мМ.

Преимущества использования

- Краситель ROX позволяет нормировать сигнал репортерной флуоресценции.
- Сокращается время на подготовку реакции.
- Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
- Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
- Горячий старт ПЦР повышает специфичность реакции.

Ограничения к использованию

- Смеси, содержащие краситель ROX, не рекомендуется использовать на приборах LightCycler® (Roche, США).
- Смеси не рекомендуется использовать для прямой амплификации с крови.
- Смеси не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 1 т.п.о. Для амплификации длинных фрагментов ДНК рекомендуется использовать Encyclo полимеразу.