Вектор pKAN-T предназначен для быстрого клонирования продуктов ПЦР без предварительной обработки эндо- или экзонуклеазами.
Вектор представляет собой линеаризованную плазмиду с выступающими фосфорилированными 3’-концевыми тимидинами. Эффективное лигирование ПЦР-продукта в вектор pKAN-T основано на способности Таq-полимеразы и ее аналогов нематрично добавлять на 3’-конец синтезированной цепи ДНК дезоксиаденозин. Таким образом, продукт ПЦР и вектор pKAN-T несут выступающие комплементарные 3’-концевые нуклеотиды А:Т. Наличие таких «липких» концов обеспечивает значительно более высокую эффективность лигирования по сравнению с лигированием по «тупым» концам.
Фасовка содержит лиофилизированный вектор, который необходимо растворить в 25 мкл деионизированной воды (до концентрации 50 нг/мкл). Этого количества достаточно для постановки 25 стандартных реакций лигирования объемом 10 мкл. Вектор pKAN-T несет ген устойчивости к канамицину.

Основные свойства вектора pKAN-T:
• Клонирование ПЦР-продуктов в вектор не требует дополнительной ферментативной обработки;
• pKAN-T несет ген устойчивости к канамицину;
• Вектор обеспечивает возможность бело-голубой селекции клонов (по результатам ПЦР-скрининга не менее 90% белых колоний содержат рекомбинантную плазмидную ДНК);
• Вектор можно использовать для клонирования как индивидуальных ампликонов, так и сложных смесей (например, амплифицированных библиотек кДНК);
• Возможен отбор рекомбинантных клонов путем ПЦР-скрининга бактериальных колоний с использованием стандартной пары праймеров;
• Растворенный в воде pKAN-T вектор выдерживает не менее 10-15 циклов размораживания/замораживания без снижения эффективности клонирования
• Рекомендуемый размер вставки — до 1 000 п.о. Клонирование фрагментов большего размера возможно, однако эффективность такого клонирования резко снижается.



Инструкция