Иммуноблот Toxo IgG [авидность] (не для использования в медицинских целях)

Назначение: набор recomLine Toxoplasma IgG [Avidity] предназначен для качественного определения человеческих IgG-антител к Toxoplasma gondii и определения авидности IgG-антител в образцах сыворотки или плазмы методом иммуноблота с целью подтверждения результатов скрининговых тестов.
Реагент для определения авидности методом recomLine Toxoplasma IgG MIKROGEN может быть заказан дополнительно (кат. №. 481-1101).
Замечание: оценку и интерпретацию результатов определения IgG-, IgM и IgA-антител методом иммуноблота рекомендуется проводить в совокупности.
Анализируемые антигены: рекомбинантные высокоочищенные белки Toxoplasma gondii ROP1c, MIC3, GRA7, GRA8, p30, MAG1, GRA1, rSAG1.
Чувствительность: 100.0%.
Специфичность: 94.1%.
Приложения теста: токсоплазмоз – паразитарное заболевание, возбудителем которого является внутриклеточный паразит Toxoplasma gondii. Представители семейства кошачьих являются окончательными хозяевами этого патогена. Половой цикл развития происходит только в организме окончательного хозяина, приводя к выделению инфекционных ооцист возбудителя. При альтернативном пути жизненного цикла паразита человек может заразиться при употреблении недостаточно термически обработанного мяса, так как Toxoplasma gondii персистирует у свиней, коз и других млекопитающих. Еще одним источником инфекции может быть трансплацентарная передача Toxoplasma gondii от недавно инфицированной матери к плоду (врожденный токсоплазмоз). Токсоплазмоз – одно из наиболее частых паразитарных заболеваний в центральной Европе. Частота сероположительных случаев в популяции высока и повышается с возрастом. Она увеличивается примерно на 1% за год жизни. Встречаемость врожденного токсоплазмоза в центральной Европе примерно 5-6 случаев на 1000 живых новорожденных. Течение инфекции Toxoplasma gondii у иммунокомпетентных людей обычно бессимптомное, редко развиваются неспецифические симптомы, похожие на грипп. Начальная инфекция переходит в пожизненную персистенцию паразита или приводит к пожизненному иммунитету к инфекции Toxoplasma gondii. После инфицирования патоген вначале проходит фазу обязательной внутриклеточной пролиферации в форме быстро делящихся тахизоитов. Затем начинается дифференцировка тахизоитов в брадизоиты под влиянием иммунного ответа. Брадизоиты персистируют на протяжении жизни хозяина в нервных тканях и мускулатуре, образуя кисты. Врожденный токсоплазмоз может вызывать серьезные повреждения плода. Вероятность заражения повышается, хотя тяжесть клинических проявлений при этом снижается, при увеличении срока беременности. Инфицирование в первом триместре обычно приводит к гибели плода. Другие исходы включают энцефалит с тяжелыми неврологическими расстройствами, дети с субклинически протекающей инфекцией, у которых могут проявляться незначительные отставания в умственном развитии или вообще отсутствовать любые симптомы. Лекарственная терапия может быть назначена при подтверждении первичной инфекции в период беременности. Как правило, такие меры существенно снижают тяжесть симптомов и, в дальнейшем, осложнений, вызванных внутриутробной инфекцией Toxoplasma gondii. Токсоплазмоз также может приводить к серьезным осложнениям у иммунокомпрометированных больных. Диагностика: так как течение токсоплазменной инфекции обычно бессимптомное, диагностические процедуры основаны на серологических методах. Метод Sabin-Feldman, предложенный в 1948, до сих пор остается «золотым стандартом» в диагностике токсоплазмоза благодаря очень высокой чувствительности теста. Однако сам метод достаточно дорогой и сложный в постановке и в настоящий момент используется достаточно редко, в основном как референсный метод. Другими используемыми методами являются метод иммунофлуоресценции, реакция связывания комплемента и реакция агглютинации. Главной задачей всех этих серологических тестов являются, в основном, профилактические мероприятия в период беременности на основе факта, была ли беременная женщина вновь инфицирована или продуктивная инфекция присутствовала до зачатия. Гуморальный иммунный ответ начинается с образования IgM-антител через несколько дней после инфекции, пик может наблюдаться уже через 2-4 недели. Титр IgG начинает расти примерно через 2 недели после инфекции, достигая пика от 6-8 недель до 3 месяцев после инфицирования, и после этого начинает постепенно снижаться. Первые три месяца после инфекции называют I фазой инфекции (сероконверсия). В этот период рекомендуется проводить контроль титров каждые 2-3 недели. В последующей II фазе в норме наблюдаются высокие титры, но нет дополнительного увеличения титра антител. Эта фаза распространяется на период от примерно 3 до 6 месяцев после инфекции и называется фазой активной инфекции. Также рекомендуется проводить контроль титра каждые 2-3 недели на протяжении II фазы. Фазу I и фазу II объединяют как фазу острой инфекции. В следующей фазе заболевания (в фазе III) концентрация антител начинает снижаться, начиная с IgA и IgM, а затем и IgG. Специфические IgM-антитела в норме персистируют до одного года, но в некоторых случаях встречаются на протяжении 3 лет и дольше. Эта фаза (период с 6 по 12/36 месяцы после инфекции) называется фазой подострой инфекции. На этой фазе рекомендуется проводить контроль титра антител для подтверждения отсутствия роста титра. В последующей фазе латентной инфекции ни IgA, ни IgM антитела не выявляются, но присутствуют средние или низкие титры IgG. Существует иммунитет к последующему инфицированию Toxoplasma gondii. Фазы инфекции T. gondii обычно соответствуют следующим периодам времени: Фаза I: 0-3 месяцев после инфицирования, Фаза II: ~ 3-6 месяцев после инфицирования, Фаза III: -6-12 (-36) месяцев после инфицирования, Фаза IV: >12->(-36) месяцев после инфицирования. [согласно H.HIobil, K.Friese: ,,Pranantale Toxoplasmose. Infektionserkrankungen der Schwangeren und des Neugeborenen, 1998, 292-307]. Подводя итог, можно сказать, что выявления IgM-антител недостаточно для диагностики острого токсоплазмоза. В редких случаях острая инфекция сопровождается очень низким или практически неопределяемым уровнем IgM-антител («IgM-низкая реактивность»). В случае очень раннего начала терапии титры антител, в особенности титр IgM, быстро снижаются. Так как подтверждение присутствия IgM-антител в сыворотке является недостаточным критерием острой инфекции токсоплазмы; определение авидности сывороточных IgG-антител очень важно в диагностике токсоплазмоза. Диагностика инфекции может быть упрощена определением авидности IgG-антител. Цикл созревания IgG-антител характеризуется тем, что антитела на ранней фазе обладают низкой авидностью, а антитела после завершения инфекции обладают высокой авидностью. Низкоавидные антитела могут быть смыты с сайта связывания тест-стрипа реагентом авидности, тогда как высокоавидные антитела не удаляются таким способом. Параллельное тестирование двух IgG-тест-стрипов, один из которых должен быть обработан реагентом авидности, покажет, обладают ли IgG-антитела низкой (острая фаза) или высокой (завершенная инфекция) авидностью. Рекомбинантные антигены, использованные в данном методе, получены из обеих форм T. gondii: тахозоитов, доминирующих в фазе продуктивной инфекции, и из брадизоитов, а также использованы общие для этих форм антигены. Это иммунодоминантные антигены, и реакция антител с ними облегчает подтверждение статуса инфекции. Характеристика используемых рекомбинантных антигенов: R0P1 (p66) - антиген тахизоитов и брадизоитов, для него характерен IgM-ответ, IgM-антитела персистируют, как правило, в подострой фазе инфекции, IgA-антитела редки, и обычно только в острой фазе, часто встречаются низкоавидные IgG-антитела в латентной фазе, нет титра IgG, если инфекция давно прошла. MAG1 (p65) - антиген брадизоитов, обычно вызывает очень слабый IgA- и IgM-ответ, присутствуют IgG-антитела (с низкой авидностью), как правило, не в начале фазы I, нет низкоавидных IgG-антител в подострой и латентной фазе. rSAG1 (p30) - антиген тахизоитов, иногда неспецифически взаимодействует с IgM-антителами, IgG-антитела (с низкой авидностью), как правило, не появляются до фазы II, нет низкоавидных антител IgG в латентной фазе, титр IgG-антител обычно персистирует пожизненно. GRA7 (p29) - антиген тахизоитов и брадизоитов, IgM-антитела встречаются редко, но обычно исключительно в острой фазе, IgG-антитела (с низкой авидностью) уже присутствуют на ранней I фазе, повышена авидность IgG-антител до конца фазы I, титр IgG антител часто персистирует пожизненно GRA8 (P35) - антиген тахизоитов и брадизоитов, в острой фазе обычно присутствуют IgM-антитела, в подострой фазе их уровень снижается, IgG антитела (с низкой авидностью) уже присутствуют на ранней острой фазе, антитела с низкой авидностью часто встречаются также в подострой и латентной фазе, нет титра IgG, если инфекция давно прошла. Основным маркером IgM-ответа при тестировании методом recomLine Toxoplasma является антиген ROP1. IgM-антитела к другим антигенам имеют более низкую значимость. IgM-aнтитела к ROP1 практически всегда присутствуют на ранней фазе инфекции и обычно ответственны за долгосрочную персистенцию титра IgM. На ранней фазе инфекции также часто регистрируются IgM-антитела к GRA8, которые тоже достаточно часто персистируют в период острой фазы инфекции, хотя обычно не так долго. IgM-ответ к GRA7 антигену встречается редко и обычно очень слабо выражен, и обычно встречается только в острой фазе инфекции. Данные для отдельных видов IgM (например, только ROP1- или GRA8-реактивность), без определения IgG-антител, должны оцениваться очень осторожно. Необходимо учитывать сероконверсию, но нельзя исключать неспецифическую реактивность. Таким образом, контроль титра через 2-3 недели является обязательным. При лечении титр IgM-антител заметно быстро падает. IgA-ответ в общем случае очень разнообразен. Его может не быть вообще, но присутствие IgA-антител может подтверждать острую токсоплазменную инфекцию. Тип IgA-ответа не дает существенной информации для острой фазы инфекции. IgG-ответ характеризуется в основном GRA7 и rSAG1. В то время как IgG-антитела к GRA7 или GRA8 в норме уже присутствуют в начале фазы I, IgG-антитела к MAG1 выявляются позже. IgG-антитела к rSAG1, как правило, встречаются не ранее фазы II. IgG-антитела к SAG1 и/или GRA7 обычно могут определяться у пациента в течение жизни, тогда как титр IgG-антител к ROP1 и GRA8 обычно падает ниже предела чувствительности метода. Сомнительные результаты для IgG (например, отдельные антитела к GRA7) не подтверждают наличия иммунитета к инфекции T. gondii. В большинстве случаев определение авидности IgG-антител для каждого конкретного антигена позволяет проводить более точную оценку статуса инфекции, в частности, дискриминацию между острой инфекцией Toxoplasma gondii и подострой инфекцией с персистирующими IgM-антителами. Интерпретация авидности для IgG-антител должна быть сделана только для MAG1, rSAG1 и GRA7. Во многих случаях для GRA8 и ROP1 (другие антигены в методе recomLine Toxoplasma) не было найдено высокоавидных антител. Описана последовательность типичной прогрессии IgG-ответа на инфекцию Toxoplasma gondii. В отдельных случаях могут наблюдаться отклонения от типичного течения. В начале фазы I инфекции присутствуют только низкоавидные IgG-антитела к GRA7 и GRA8. На протяжении фазы I авидность антител к GRA7 и GRA8 постепенно повышается, и появляются первые антитела к MAG1. В конце фазы I могут наблюдаться первые высокоавидные антитела к GRA7 и/или GRA8, а также антитела к MAG1 с промежуточной авидностью. Может начать определяться иммунный ответ к rSAG1, обычно слабый в острой фазе. В течение фазы II реактивность к rSAG1 повышается, и постепенно увеличивается и авидность антител к rSAG1. Появляются высокоавидные антитела к MAG1 в дополнение к высокоавидным антителам к GRA7. В подострой фазе инфекции (фаза III) к высокоавидным антителам к GRA7 и MAG1 присоединяются антитела к rSAG1 с промежуточной или высокой авидностью. Пожалуйста, учтите, что в поздней фазе инфекции (фаза IV) только авидность IgG-антител против rSAG1, MAG1 и GRA7 остается постоянно высокой, следовательно, ROP1 и GRA8 не следует включать в интерпретацию авидности. IgG-антитела с низкой или средней авидностью к ROP1 и GRA8 могут также встречаться в пост-острую фазу инфекции. В очень редких случаях одиночные IgG-антитела со средней авидностью к GRA7, MAG1 или rSAG1 могут также наблюдаться после острой фазы инфекции. По этой причине данные по авидности к этим антигенам должны тщательно взвешиваться при интерпретации авидности. Особенное внимание следует уделить эффекту влияния терапии на продукцию IgG-антител и авидность. Важные замечания по интерпретации recomLine Toxoplasma: a) Определение IgG-антител высокой авидности для p30 без высокой авидности для MAG1, GRA1 и rSAG1 указывает на наличие инфекции более 2 месяцев назад. Остальные IgG антитела должны быть представлены. b) Определение IgG-антител высокой авидности для MAG1 и/или GRA1 исключает острую инфекцию в первые 3 месяцев. с) Определение IgG-антител высокой авидности для rSAG1 исключает острую инфекцию в первые 6 месяцев. d) Авидность для GRA7 и/или GRA8 не может быть использована для определения времени инфицирования. e) Определение IgG-антител высокой авидности для GRA7 и/или GRA8 не исключает острую инфекцию в первые 3 месяца. f) Появление IgG-антител для GRA7 и/или GRA8 без наличия IgG-антител для rSAG1 и MAG1 независимо от индивидуальной авидности требует последующей проверки с одновременным рассмотрением IgM-антител. g) Рост авидности для различных антигенов и развитие иммунного ответа могут задерживаться под влиянием антипаразитической терапии в отдельных случаях.