Иммуноблот Toxo IgM [IgA] (не для использования в медицинских целях)

Назначение: набор recomLine Toxoplasma IgM [IgA] предназначен для качественного определения человеческих IgM/IgA-антител к Toxoplasma gondii в образцах сыворотки или плазмы методом иммуноблота с целью подтверждения результатов скрининговых тестов.
Замечание: оценку и интерпретацию результатов определения IgG-, IgM и IgA-антител методом иммуноблота рекомендуется проводить в совокупности.
Анализируемые антигены: рекомбинантные высокоочищенные белки Toxoplasma gondii ROP1c, MIC3, GRA7, GRA8, p30, MAG1, GRA1, rSAG1.
Чувствительность: для IgM 83.2%, для IgA 100%.
Специфичность: для IgM 93.2%, для IgA 96%.
Приложения теста: токсоплазмоз – паразитарное заболевание, возбудителем которого является внутриклеточный паразит Toxoplasma gondii. Представители семейства кошачьих являются окончательными хозяевами этого патогена. Половой цикл развития происходит только в организме окончательного хозяина, приводя к выделению инфекционных ооцист возбудителя. При альтернативном пути жизненного цикла паразита человек может заразиться при употреблении недостаточно термически обработанного мяса, так как Toxoplasma gondii персистирует у свиней, коз и других млекопитающих. Еще одним источником инфекции может быть трансплацентарная передача Toxoplasma gondii от недавно инфицированной матери к плоду (врожденный токсоплазмоз). Токсоплазмоз – одно из наиболее частых паразитарных заболеваний в центральной Европе. Частота сероположительных случаев в популяции высока и повышается с возрастом. Она увеличивается примерно на 1% за год жизни. Встречаемость врожденного токсоплазмоза в центральной Европе примерно 5-6 случаев на 1000 живых новорожденных. Течение инфекции Toxoplasma gondii у иммунокомпетентных людей обычно бессимптомное, редко развиваются неспецифические симптомы, похожие на грипп. Начальная инфекция переходит в пожизненную персистенцию паразита или приводит к пожизненному иммунитету к инфекции Toxoplasma gondii. После инфицирования патоген вначале проходит фазу обязательной внутриклеточной пролиферации в форме быстро делящихся тахизоитов. Затем начинается дифференцировка тахизоитов в брадизоиты под влиянием иммунного ответа. Брадизоиты персистируют на протяжении жизни хозяина в нервных тканях и мускулатуре, образуя кисты. Врожденный токсоплазмоз может вызывать серьезные повреждения плода. Вероятность заражения повышается, хотя тяжесть клинических проявлений при этом снижается, при увеличении срока беременности. Инфицирование в первом триместре обычно приводит к гибели плода. Другие исходы включают энцефалит с тяжелыми неврологическими расстройствами, дети с субклинически протекающей инфекцией, у которых могут проявляться незначительные отставания в умственном развитии или вообще отсутствовать любые симптомы. Лекарственная терапия может быть назначена при подтверждении первичной инфекции в период беременности. Как правило, такие меры существенно снижают тяжесть симптомов и, в дальнейшем, осложнений, вызванных внутриутробной инфекцией Toxoplasma gondii. Токсоплазмоз также может приводить к серьезным осложнениям у иммунокомпрометированных больных. Диагностика: так как течение токсоплазменной инфекции обычно бессимптомное, диагностические процедуры основаны на серологических методах. Метод Sabin-Feldman, предложенный в 1948, до сих пор остается «золотым стандартом» в диагностике токсоплазмоза благодаря очень высокой чувствительности теста. Однако сам метод достаточно дорогой и сложный в постановке и в настоящий момент используется достаточно редко, в основном как референсный метод. Другими используемыми методами являются метод иммунофлуоресценции, реакция связывания комплемента и реакция агглютинации. Главной задачей всех этих серологических тестов являются, в основном, профилактические мероприятия в период беременности на основе факта, была ли беременная женщина вновь инфицирована или продуктивная инфекция присутствовала до зачатия. Гуморальный иммунный ответ начинается с образования IgM-антител через несколько дней после инфекции, пик может наблюдаться уже через 2-4 недели. Титр IgG начинает расти примерно через 2 недели после инфекции, достигая пика от 6-8 недель до 3 месяцев после инфицирования, и после этого начинает постепенно снижаться. Первые три месяца после инфекции называют I фазой инфекции (сероконверсия). В этот период рекомендуется проводить контроль титров каждые 2-3 недели. В последующей II фазе в норме наблюдаются высокие титры, но нет дополнительного увеличения титра антител. Эта фаза распространяется на период от примерно 3 до 6 месяцев после инфекции и называется фазой активной инфекции. Также рекомендуется проводить контроль титра каждые 2-3 недели на протяжении II фазы. Фазу I и фазу II объединяют как фазу острой инфекции. В следующей фазе заболевания (в фазе III) концентрация антител начинает снижаться, начиная с IgA и IgM, а затем и IgG. Специфические IgM-антитела в норме персистируют до одного года, но в некоторых случаях встречаются на протяжении 3 лет и дольше. Эта фаза (период с 6 по 12/36 месяцы после инфекции) называется фазой подострой инфекции. На этой фазе рекомендуется проводить контроль титра антител для подтверждения отсутствия роста титра. В последующей фазе латентной инфекции ни IgA, ни IgM антитела не выявляются, но присутствуют средние или низкие титры IgG. Существует иммунитет к последующему инфицированию Toxoplasma gondii. Фазы инфекции T. gondii обычно соответствуют следующим периодам времени: Фаза I: 0-3 месяцев после инфицирования, Фаза II: ~ 3-6 месяцев после инфицирования, Фаза III: -6-12 (-36) месяцев после инфицирования, Фаза IV: >12->(-36) месяцев после инфицирования. [согласно H.HIobil, K.Friese: ,,Pranantale Toxoplasmose. Infektionserkrankungen der Schwangeren und des Neugeborenen, 1998, 292-307]. Подводя итог, можно сказать, что выявления IgM-антител недостаточно для диагностики острого токсоплазмоза. В редких случаях острая инфекция сопровождается очень низким или практически неопределяемым уровнем IgM-антител («IgM-низкая реактивность»). В случае очень раннего начала терапии титры антител, в особенности титр IgM, быстро снижаются. Так как подтверждение присутствия IgM-антител в сыворотке является недостаточным критерием острой инфекции токсоплазмы; определение авидности сывороточных IgG-антител очень важно в диагностике токсоплазмоза. Рекомбинантные антигены, использованные в данном методе, получены из обеих форм T. gondii: тахозоитов, доминирующих в фазе продуктивной инфекции, и из брадизоитов, а также использованы общие для этих форм антигены. Это иммунодоминантные антигены, и реакция антител с ними облегчает подтверждение статуса инфекции. Характеристика используемых рекомбинантных антигенов: R0P1 (p66) - антиген тахизоитов и брадизоитов, для него характерен IgM-ответ, IgM-антитела персистируют, как правило, в подострой фазе инфекции, IgA-антитела редки, и обычно только в острой фазе, часто встречаются низкоавидные IgG-антитела в латентной фазе, нет титра IgG, если инфекция давно прошла. MAG1 (p65) - антиген брадизоитов, обычно вызывает очень слабый IgA- и IgM-ответ, присутствуют IgG-антитела (с низкой авидностью), как правило, не в начале фазы I, нет низкоавидных IgG-антител в подострой и латентной фазе. rSAG1 (p30) - антиген тахизоитов, иногда неспецифически взаимодействует с IgM-антителами, IgG-антитела (с низкой авидностью), как правило, не появляются до фазы II, нет низкоавидных антител IgG в латентной фазе, титр IgG-антител обычно персистирует пожизненно. GRA7 (p29) - антиген тахизоитов и брадизоитов, IgM-антитела встречаются редко, но обычно исключительно в острой фазе, IgG-антитела (с низкой авидностью) уже присутствуют на ранней I фазе, повышена авидность IgG-антител до конца фазы I, титр IgG антител часто персистирует пожизненно GRA8 (P35) - антиген тахизоитов и брадизоитов, в острой фазе обычно присутствуют IgM-антитела, в подострой фазе их уровень снижается, IgG антитела (с низкой авидностью) уже присутствуют на ранней острой фазе, антитела с низкой авидностью часто встречаются также в подострой и латентной фазе, нет титра IgG, если инфекция давно прошла. Основным маркером IgM-ответа при тестировании методом recomLine Toxoplasma является антиген ROP1. IgM-антитела к другим антигенам имеют более низкую значимость. IgM-aнтитела к ROP1 практически всегда присутствуют на ранней фазе инфекции и обычно ответственны за долгосрочную персистенцию титра IgM. На ранней фазе инфекции также часто регистрируются IgM-антитела к GRA8, которые тоже достаточно часто персистируют в период острой фазы инфекции, хотя обычно не так долго. IgM-ответ к GRA7 антигену встречается редко и обычно очень слабо выражен, и обычно встречается только в острой фазе инфекции. Данные для отдельных видов IgM (например, только ROP1- или GRA8-реактивность), без определения IgG-антител, должны оцениваться очень осторожно. Необходимо учитывать сероконверсию, но нельзя исключать неспецифическую реактивность. Таким образом, контроль титра через 2-3 недели является обязательным. При лечении титр IgM-антител заметно быстро падает. IgA-ответ в общем случае очень разнообразен. Его может не быть вообще, но присутствие IgA-антител может подтверждать острую токсоплазменную инфекцию. Тип IgA-ответа не дает существенной информации для острой фазы инфекции.