Набор БиоМастер RT-LAMP SYBR (2×) для одновременной обратной транскрипции и изотермической амплификации в реальном времени, 400 реакций по 25 мкл

Набор БиоМастер RT-LAMP SYBR (2×) предназначен для проведения обратной транскрипции (RT) и петлевой изотермической амплификации (LAMP) в одной пробирке, в режиме реального времени с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green I. Представленная форма набора для проведения RT-LAMP экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования. Инертный краситель в составе БиоМастер RT-LAMP SYBR (2×) окрашивает её в голубой цвет и упрощает контроль за раскапыванием смеси при использовании многолуночных планшетов. 



2× буфер для RT-LAMP с SYBR оптимизирован для эффективного протекания как обратной транскрипции, так и изотермической амплификации в режиме реального времени. Добавки и усилители, входящие в него, позволяют проводить эффективную RT-LAMP со сложных и GC-богатых матриц. Инертный краситель в составе буфера окрашивает его в голубой цвет и облегчает контроль за раскапыванием смеси при использовании многолуночных планшетов. В состав 2× буфера для RT-LAMP с SYBR входят все необходимые компоненты реакции (исключая ферменты, ДНК-матрицу и праймеры): буферный компонент; смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов; ионы Mg²⁺; интеркалирующий краситель SYBR Green I; инертный краситель. Полный состав БиоМастер RT-LAMP SYBR (2×): 100 мМ Трис-HCl, рН 8.9, 20 мМ KCl, 2 мМ каждого нуклеозидтрифосфата, 12 мМ MgCl₂, 0,5% Tween 20, стабилизаторы ДНК-полимеразы Bst LF, SYBR Green I, инертный краситель.

В состав 25× БиоМастер RT-LAMP-микс входит обратная транскриптаза RNAscribe RT и ДНК-полимераза Bst LF в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций. Полный состав БиоМастер RT-LAMP-микс: 50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °C), 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ дитиотреитол, 50 % (v/v) глицерин и 0.1 % (v/v) NP-40, ингибитор РНКаз, обратная транскриптаза RNAscribe RT и ДНК-полимераза Bst LF.

RNAscribe RT – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, оптимум активности - при 55°С (активна до 65°С). RNAscribe RT способна синтезировать первую цепь кДНК длиной до 9 тысяч нуклеотидов и включать модифицированные основания. Ее быстрая скорость реакции позволяет выполнять синтез всего за 15 минут, а высокая рабочая температура фермента (до 65°C) обеспечивает высокий выход и специфичность реакции. 
ДНК-полимераза Bst LF представляет собой рекомбинантный большой фрагмент (LF) полимеразы Bst (Bacillus stearothermophilus), обладает 5´-> 3´ -полимеразной активностью, но не обладает 5′-> 3’ и 3′-> 5’-экзонуклеазной активностью, что позволяет использовать ее для проведения изотермической амплификации. Наибольшую активность фермент проявляет в температурном диапазоне 60-65°С.

Область применения набора БиоМастер RT-LAMP SYBR (2×):
• одношаговая обратная транскрипция (RT) и петлевая изотермическая амплификация (LAMP) в режиме реального времени с использованием интеркалирующего красителя SYBR Green I
• петлевая изотермическая амплификация в режиме реального времени с использованием интеркалирующего красителя SYBR Green I
• петлевая изотермическая амплификация с детекцией по конечной точке

Преимущества использования набора:
• Высокая чувствительность (10 пг – 1 мкг РНК);
• Смесь окрашена для облегчения раскапывания;
• Сокращается время на подготовку реакции;
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов реакции;
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций.

Инструкция