Набор Mint-2 для синтеза кДНК со сменой матрицы (SMART), 20 реакций по 10 мкл

Обратная транскриптаза Mint (Mint ревертаза) - РНК-зависимая ДНК полимераза, предназначенная для синтеза первой цепи кДНК с одноцепочечной РНК матрицы. Особенностью Mint-ревертазы является ее способность после завершения синтеза молекулы кДНК нематрично присоединять к ее 3'-концу 3-5 дезоксинуклеотидов (преимущественно C), что позволяет использовать ее для синтеза полноразмерных библиотек кДНК и клонирования 5'-концов кДНК (5'-RACE).

Основные свойства Mint ревертазы:

1. Лишена РНКазной активности
2. Обладает повышенной термической стабильностью (42-45°С)
3. Обеспечивает высокий выход кДНК
4. Обладает высокой процессивностью (синтезирует кДНК длиной до 7.5 т.п.о.)
Mint ревертаза входит в состав наборов реактивов Mint (кат.# SK001) и Mint-2 (кат.# SK005), предназначенных для приготовления двухцепочечной амплифицированной кДНК, обогащенной полноразмерными последовательностями, на основе тотальной или полиА+ РНК.

Наборы Mint и Mint-2 основаны на методе синтеза кДНК со сменой матрицы (SMART) . Получаемая кДНК обогащена полноразмерными последовательностями и содержит известные последовательности адаптеров на обоих концах. Процедура синтеза занимает 6-8 часов. Минимальное стартовое количество РНК для синтеза первой цепи кДНК составляет 250 нг тотальной или 100 нг полиА+ РНК. Для достижения наилучшего результата рекомендуется использовать 1- 2 мкг тотальной РНК или 0,5-1 мкг полиА+ РНК.

кДНК, полученная с помощью набора Mint, может быть использована для приготовления ненаправленных библиотек кДНК, супрессионной вычитающей гибридизации (SSH), нормализации с помощью набора реактивов Trimmer-2 , быстрой амплификации 3'- и 5'-концевых фрагментов полноразмерных транскриптов (RACE) и других приложений.
Набор Mint-2 содержит дополнительные адаптеры, позволяющие приготовить кДНК, оптимальную для последующего секвенирования на платформах Roche/454, ABI/SOLiD или Illumina/Solexa и для направленного клонирования библиотек кДНК.

Mint ревертаза, 20 мкл (200 ед./мкл)
5X Mint буфер, 80 мкл
DTT (20 мМ), 30 мкл
Смесь dNTP (10 мМ каждого), 120 мкл
Смесь праймеров 454 PCR Primer mix (10 мМ каждого), 100 мкл
PlugOligo-1 адаптер (15 мкМ), 25 мкл
PlugOligo-3M адаптер (15 мкМ), 25 мкл
CDS-1 адаптер (10 мкМ), 25 мкл
CDS-Gsu адаптер (10 мкМ), 25 мкл
CDS-4M адаптер (10 мкМ), 25 мкл
IP смесь, 130 мкл
Контрольная тотальная РНК (0,35 мкг/мкл), 30 мкл
ПЦР праймер М1 (10 мкМ), 150 мкл
50X смесь полимераз Encyclo, 100 мкл
10X Encyclo буфер, 600 мкл
Вода для ПЦР, 2 x 1.5 мл